VEGF165和VEGF121在MC3T3-E1細胞中的表達及生物學功能

目的:構建一個能在MC3T3-E1細胞中穩(wěn)定表達,并具有生物學活性的VEGF165和VEGF121基因表達載體.方法:采用RT-PCR技術從HL-60細胞中擴增人VEGF165和VEGF121基因,將獲得的基因定向插入pcDNA3.1(+)真核表達質(zhì)粒中,測序正確后用脂質(zhì)體將表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入MC3T3-E1細胞.細胞經(jīng)G418加壓有限稀釋篩選,采用ELISA法、Western blot法及免疫熒光法檢測VEGF蛋白表達,并用MTT法檢測表達的蛋白對血管內(nèi)皮細胞株(HUECV304)的增殖活性影響.結果:通過基因測序表明獲得的VEGF165和VEGF121與GeneBank登錄的序列一致,構建的質(zhì)粒分別為VEGF165/pcDNA3.1(+)質(zhì)粒和VEGF121/pcDNA3.1(+)質(zhì)粒,ELISA及Western blot檢測結果均表明VEGF165和VEGF121基因轉(zhuǎn)染MC3T3-E1后能在細胞中穩(wěn)定表達,表達產(chǎn)物能明顯促進HUECV304細胞生長.結論:基因轉(zhuǎn)染的MC3T3-E1細胞能穩(wěn)定、高效表達具有生物學活性的VEGF165和VEGF121重組蛋白.

作 者： 賀俊 王慧明 姚航平 HE Jun WANG Hui-ming YAO Hang-ping   作者單位： 浙江大學醫(yī)學院,附屬第一醫(yī)院,浙江,杭州,310003  刊 名： 浙江大學學報（醫(yī)學版）  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES)  年，卷(期)： 2006 35(3)  分類號： Q813  關鍵詞： 血管內(nèi)皮生長因子類/代謝   血管內(nèi)皮生長因子類/遺傳   3T3細胞   基因表達   轉(zhuǎn)染   質(zhì)粒  

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